中基肽康Plus和海洋生物肽对嗜水气单胞菌的抑菌活性比较

中基肽康Plus和海洋生物肽抑菌活性比较分析

一、实验目的

检测海洋生物肽和中基肽康plus对嗜水气单胞菌的抑菌活性。

二、实验试剂和器材

试剂：胰蛋白胨、酵母浸粉、氯化钠、琼脂

仪器和器材：离心机、超净工作台、全波长酶标仪、电子天平、恒温培养箱、37℃摇床、28℃摇床、5ml移液器、1ml移液器、200ul移液器、50ml试管、15ml试管、1.5ml离心管。

指示菌：嗜水气单胞菌。

三、实验方法和步骤

1、配制所需培养基

LB液体培养基：胰蛋白胨1%、酵母浸粉0.5%、氯化钠1%，配制200ml，分装至试管，每支5ml，121℃灭菌20分钟备用。

LB液体培养基：胰蛋白胨1%、酵母浸粉0.5%、氯化钠1%、琼脂粉1.5%，配制150ml，121℃灭菌20分钟备用。

2、活化指示菌

取收到的嗜水气单胞菌200ul接种到装有5ml LB液体培养基的试管中，37℃、200r/min培养18-24h，用接种环取一环摇好的菌液在LB平板上划线，37℃培养24h。

3、培养指示菌

取嗜水气单胞菌平板，挑单菌落于装有5mlLB液体培养基的试管中，37℃、200 rpm/min摇床培养18-22小时。

4、指示菌浓度调整

取适量的指示菌悬液加入适量的已灭菌的LB培养基，使菌液OD600约为0.15-0.2。

5、待测样品处理

分别称取称取0.5克深海生物肽和0.5克抗菌肽喷干粉，分别加5ml纯水充分溶解后，分装在2ml离心管中，14000r/min离心5分钟，取上清用0.22um滤膜过滤，另留一份上清再离心一次，不过滤。

5、待测样品活性检测

将待测样品与指示菌以1:5的比例（1ml待测样品和4ml指示菌）加入已灭菌的试管中，混匀，同时设立培养基和指示菌混合液的空白对照，液体抗菌肽与指示菌混合为阳性对照。做2组分别放置28℃和 37℃摇床200rpm/min培养，培养3小时，在3小时读取OD₆₀₀数值，并记录结果。

四、实验结果

根据所读取的OD₆₀₀进行抑菌率分析，计算公式如下：

样品抑菌率（%）=（空白对照OD₆₀₀-检测样品OD₆₀₀）/空白对照OD600×100%