中基肽康Plus与抗生素抑菌效果对比

中基肽康plus与抗生素抑菌效果对比

1、实验目的

比较中基肽康Plus和四环素、土霉素、庆大霉素对耐药性大肠杆菌和标准大肠杆菌菌株的抑菌效果

2、实验试剂和器材

实验菌株：分别耐四环素、土霉素和庆大霉素的大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌；大肠杆菌标准菌株ATCC25922。

试验材料：无菌试管、营养琼脂平板、1×LB液体培养基、2×LB液体培养基、移液器及枪头、酶标板、灭菌水、灭菌的0.22 μm过滤器、全波长酶标仪、电子天平、恒温培养箱。

    待测样品：四环素、土霉素、庆大霉素和中基肽康plus液体抗菌肽样品。

3实验方法和步骤

3.1指示菌复苏

挑取在营养琼脂平板上的大肠杆菌/沙门氏菌到含有5 ml液体培养基的试管A中，37℃、200rpm过夜培养。

3.2菌液稀释

吸取一定量试管A中的菌液到液体培养基中，在紫外分光光度计OD₆₀₀下调整稀释后的菌液吸光值至0.1 ± 0.01，此时菌液中细菌浓度约为1.5 × 10⁸ CFU/ml。用液体培养基将调整好的菌液稀释1000倍，用于MIC测定。

3.3微量肉汤法

3.3.1 受试溶液的准备

（1）中基肽康Plus抗菌肽原液，抗菌肽的含量为0.22g/L。

（2） 四环素标准品工作溶液：准确称取四环素标准品12.8mg，置50ml试管中，加10ml无菌水充分溶解，得到浓度为1280μg/ml的工作溶液。

（3）庆大霉素溶液：取庆大霉素注射液（2万IU/ml），用无菌水稀释100倍后备用。

（4）土霉素溶液：取土霉素注射液（20万IU/ml），用无菌水稀释100倍后备用。

3.3.2 MIC操作步骤

（1）加液体培养基：在培养板的A1列孔加入100 μl 2×LB液体培养基，A 2~A12孔加入100 μl 1×LB液体培养基；

（2）加受试溶液并梯度稀释：向A1列孔加入100μl各受试溶液（如表4所示），用排枪移液器混匀后吸取100 μl到A2列孔中、混匀，再从A2列孔中吸取100 μl到A3列孔中，如此一直到A11，从A11列孔中吸取100 μl溶液弃掉；

（3）加稀释好的指示菌菌液：往A12中加入100 μl稀释好的指示菌菌液（菌数约为10⁵~10⁶CFU/ml），接着按A12~A1的顺序各加100 μl指示菌菌液（A12孔为对照组，没有受试溶液）；

（4）菌液加完后将培养板放入37oC恒温箱培养；

（5）读取结果：16~18小时候读取MIC结果，以抑制指示菌90%以上生长的样品最低浓度作为受试溶液的MIC值。

表1 不同抗生素与抗菌肽MIC试验培养板加样说明

 

4、 实验结果

根据所读取的OD₆₀₀进行抑菌率分析，计算公式如下：

样品抑菌率（%）=（空白对照OD₆₀₀-检测样品OD₆₀₀）/空白对照OD₆₀₀×100%

表2 不同抗生素与中基肽康plus抗菌肽抑菌活性对比

                                           

本试验采用的指示菌是“大肠杆菌标准菌株”。如以此菌做指示菌，中基肽康plus产品的抑菌率要远低于常用饲用抗生素；而如采用耐药菌株作为指示菌，中基肽康plus的抑菌率是四环素类等抗生素的2-20倍（见表2）。